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HPLC液相色譜儀對物質定性原理及測試準確性說明

一、關于定性幾種方式：在高效液相色譜分析過程中，對定性分析方法提出了更高的要求。

（1）利用檢測器的選擇性進行定性  將經色譜柱分離后的樣品引入的幾種不同檢測器，根據它們不同的檢測性能，視其出峰情況可以初步判別出未知化合物的具體類別。

（2）反相色譜中的“a、C”指數定性  在以硅膠為固定相的反相色譜中，待測組分保留值與流動相組成關系式中的系數能夠反映待測組分的結構特征，因此可用于待測組分的輔助定性。我們可以采用雙柱并聯（尤其時長短雙柱150*4.6和250*4.6）進行定性。

反相色譜中有機調節劑的濃度c與待測組分的分配比之間滿足對數線性關系，可表示為：

      ln k = a+Cc  （10.8）

      式中，a、C分別為與流動相性質、固定相性質有關的常數。

      基于式（10.8），盧佩章等列出了460種化合物在C18柱上不同條件下的a、C指數，并提出可不同柱系統、不同沖洗劑濃度組成時，a、C指數之間的換算方法。在相同的色譜條件下，如果樣品中某一組分的a、C指數與某已知標樣相同，即可認定兩者為同一種化合物。

此外，待測組分的分配比k作為一種結構型物性參量，其對數值與同系物碳數n之間存在良好的線性關系。

       ln k = a+bm  （10.9）

      式中，a、b為常數。對于包含同系物組分的樣品，如果已知部分同系物在色譜圖中的位置，此時，可以根據碳數規律來推測其他同系物組分。

 （3）、保留時間對照法

外標對照法

    即在相同的色譜條件下，分別進樣品溶液與高純度的單一組分對照品溶液，這里推薦先進樣品溶液，確定系統適應性沒有問題了再進對照品溶液，對比兩組分的保留時間，一般保留時間相對差異在5%以內，同時誤差在0.1min以內的認定為同一個物質，但仍遵守“同一組分保留時間肯定一樣，但保留時間一樣不一定是同一組分，保留時間不一樣的肯定不是同一組分”的原則。

標準加入法

即在相同的色譜條件下，將高純度的對照品加入樣品溶液中再上機檢測，與相同濃度未加對照品的樣品溶液比較，峰高或峰面積應呈等比例增加的，可認定為是同一物質。此法比較適用于組分比較復雜，鄰近有干擾組分峰時。

上述方法盡量使用柱效高或長柱，峰高盡量小一些，甚至可以小到定量限濃度，一些在高響應下是單個峰的，在低響應時可能是兩個峰，所以一定要注意峰形，只要峰形與對照品不一致，就要懷疑不是同一個物質。再嚴謹一點，還可以改變流動相組成、色譜柱、柱溫等，樣品中的組分峰應與對照品的組分峰有相同的變化。

（4）、破壞法

將物質進行化學破壞，可以是酸、堿降解，也可以是衍生后再進行檢測，看組分峰的變化。當然，此方法不適用于組分復雜的樣品。